Isolation and genetic characterization of Toxoplasma gondii from free-ranging and captive birds and mammals in Pernambuco state, Brazil

Abstract Recent genetic population studies on Toxoplasma gondii in Brazil have shown large genetic variability. The objective of the present study was to isolate and genotypically characterize T. gondii from free-ranging and captive wild mammals and birds in Pernambuco state, Brazil. Fragments of heart, brain, skeletal muscle and diaphragm tissue from 71 birds and 34 mammals, which were either free-ranging or captive, were collected. Samples from 32 of these animals were subjected to bioassays in mice. Samples from the remaining 73 animals underwent biomolecular diagnosis, using PCR technique, targeting a repetitive DNA fragment of 529 bp in T. gondii. A non-virulent isolate (TgButstBrPE1) was obtained from a free-ranging striated heron (Butorides striata) and, based on primary samples, seven animals were found to be positive. The primary samples and the isolate obtained were subjected to PCR-RFLP using the markers SAG1, 53SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico and CS3. ToxoDB-RFLP genotype /13 from the striated heron isolate and Type BrIII genotype from a captive otter ( Lontra longicaudis) (PS-TgLonloBrPE1) were obtained. The present study describes the first isolation and genotypic characterization of T. gondii in free-ranging striated heron, and the first genotypic characterization of T. gondii in a captive otter.

Resumo Recentes estudos genéticos nas populações deste parasita no Brasil têm mostrado grande variabilidade genética. O objetivo do presente estudo foi isolar e caracterizar genotipicamente T. gondii de aves e mamíferos de vida livre e de cativeiro no estado de Pernambuco, Brazil. Fragmentos de tecido do coração, cérebro, músculo esquelético e diafragma de 71 aves e 34 mamíferos de vida livre ou cativeiro foram colhidos. Amostras de 32 destes animais foram submetidas a bioensaios em camundongos. As amostras dos 73 animais restantes foram submetidas a diagnóstico biomolecular usando a técnica de PCR, tendo como alvo o fragmento repetitivo de 529 pb do DNA de T. gondii. Dentre os 32 bioensaios conduzidos, obteve-se um isolado não-virulento (TgButstBrPE1) de um socozinho (Butorides striata ) de vida livre, e dentre as amostras primárias, sete animais foram positivos. As amostras primárias e o isolado foram submetidos a PCR-RFLP usando os marcadores SAG1, 53SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3. Foram obtidos o genótipo ToxoDB-RFLP /13 do isolado do socozinho e o genótipo Type BrIII de uma lontra (Lontra longicaudis) de cativeiro (PS-TgLonloBrPE1). O presente estudo descreve o primeiro isolamento e caracterização genotípica de T. gondii em socozinho de vida livre, e a primeira caracterização genotípica de T. gondii em lontra em cativeiro.

Toxoplasma gondii antibodies in wild rodents and marsupials from the Atlantic Forest, state of São Paulo, Brazil

Toxoplasma gondii is a protozoan parasite that infects a large spectrum of warm-blooded animals, including humans. Small rodents and marsupials play an important role in the epidemiology of T. gondii because they are sources of infection for domestic and feral cats. Serum samples from 151 rodents and 48 marsupials, captured in the Atlantic Forest, São Paulo State, southeastern Brazil, were analyzed for the presence of T. gondii antibodies. Antibodies detected by the modified agglutination test (MAT 25) were found in 8.6% (13/151) of the rodents and 10.4% (5/48) of the marsupials, with titers ranging from 25 to 6400 and from 25 to 3200, respectively for the rodents and marsupials. Three of the eight species of rodents (Akodon spp., Oligoryzomys nigripesand Rattus norvegicus), and one from the four marsupial species (Didelphis aurita) presented positive animals. T. gondii was described for the first time in the rodent Oligoryzomys nigripes.

Toxoplasma gondii é um protozoário parasita que infecta animais de sangue quente, incluindo seres humanos. Pequenos roedores e marsupiais têm papel importante na epidemiologia do T. gondii, pois são fontes de infecção para os felídeos domésticos e selvagens. Amostras de soro de 151 roedores e 48 marsupiais, capturados na Mata Atlântica, Estado de São Paulo, Sudeste do Brasil, foram analisadas para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii. Os anticorpos foram detectados pelo Teste de Aglutinação Modificada (MAT 25), com 8,6% (13/151) dos roedores e 10,4% (5/48) dos marsupiais soropositivos, com títulos variando de 25 a 6.400 e de 25 a 3.200, respectivamente, para os roedores e os marsupiais. Três das oito espécies de roedores (Akodon spp., Oligoryzomys nigripes e Rattus norvegicus) e uma das quatro espécies de marsupiais (Didelphis aurita) apresentaram animais positivos. A presença de anticorpos anti-T. gondii foi descrita pela primeira vez no roedor Oligoryzomys nigripes.

Editorial / Editorial

Procurando atender ao objetivo de manter a regularidade da periodicidade do Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science (BJVRAS), estamos lançando o segundo fascículo de 2015. Neste número, houve o predomínio de artigos da área de Reprodução Animal, que conta com uma revisão sobre a eficiência placentária na espécie equina, dois trabalhos analisando aspectos do sêmen: perfil oxidativo de sêmen bovino criopreservado em diferentes estações do ano e criopreservação do sêmen de quatis; além de uma investigação sobre a influência da temperatura de transporte de ovários na viabilidade de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral. Na área de Cirurgia Veterinária, é investigada a contração de feridas. Na área de Clínica Veterinária, foi analisado o eletrocardiograma de cães tratados com solução oftálmica de maleato de timolol 0,5%. Na área de Medicina Veterinária Preventiva, é apresentado um trabalho que investigou a ocorrência de toxoplasmose e neosporose em cães da cidade de Natal, Rio Grande do Norte. A área de Patologia Veterinária conta com um trabalho efetuado em modelo experimental que investiga a carcinogênese química em camundongos BALB-C. Finalmente, na área de Nutrição e Produção Animal é apresentada uma investigação da reatividade de equinos à presença de estímulos sonoros.Desejamos uma boa leitura a todos.Prof. Dr. Silvio Arruda Vasco

Procurando atender ao objetivo de manter a regularidade da periodicidade do Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science (BJVRAS), estamos lançando o segundo fascículo de 2015. Neste número, houve o predomínio de artigos da área de Reprodução Animal, que conta com uma revisão sobre a eficiência placentária na espécie equina, dois trabalhos analisando aspectos do sêmen: perfil oxidativo de sêmen bovino criopreservado em diferentes estações do ano e criopreservação do sêmen de quatis; além de uma investigação sobre a influência da temperatura de transporte de ovários na viabilidade de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral. Na área de Cirurgia Veterinária, é investigada a contração de feridas. Na área de Clínica Veterinária, foi analisado o eletrocardiograma de cães tratados com solução oftálmica de maleato de timolol 0,5%. Na área de Medicina Veterinária Preventiva, é apresentado um trabalho que investigou a ocorrência de toxoplasmose e neosporose em cães da cidade de Natal, Rio Grande do Norte. A área de Patologia Veterinária conta com um trabalho efetuado em modelo experimental que investiga a carcinogênese química em camundongos BALB-C. Finalmente, na área de Nutrição e Produção Animal é apresentada uma investigação da reatividade de equinos à presença de estímulos sonoros. Desejamos uma boa leitura a todos.Prof. Dr. Silvio Arruda Vasc

Toxoplasma gondii: evaluation of immunofluorescence assay using heterologous secondary antibody in experimentally infected wild small rodents / Toxoplasma gondii: avaliação da reação de imunofluorescência indireta usando anticorpo secundário heterólogo em roedores silvestres experimentalmente infectados

Toxoplasmosis is a zoonotic infection caused by Toxoplasma gondii that affects a wide range of vertebrates. Rodents are intermediate hosts and serve as food for felids, the definitive hosts. However, because of the high variety of species in the order Rodentia, the serological diagnosis is difficult to perform, since the most used techniques require the use of specific antibody conjugated to fluorescein or enzymes. The aim of this study was to evaluate the use of a heterologous secondary antibody conjugate in Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) for diagnosis of anti-T. gondii antibodies in two species of wild rodents: Euryoryzomys russatus (WAGNER, 1848) and Calomys callosus (RENGGER, 1830). The specie Mus musculus (Linnaeus, 1758) was used as control conjugate. The animals were experimentally infected with five cysts of T. gondii (strain ME 49) per animal. The Modified Agglutination Test (MAT), which does not require the use of conjugates, and the presence of T. gondii cysts in the rodents were used to confirm the infection. For each animal species, serum samples were collected weekly for five weeks and tested (50 samples per rodent specie, total of 150 samples). None of the samples from C. callosus and E. russatus were positive in the IFAT when anti-mouse heterologous conjugate was used. Brain cysts of T. gondii were microscopically observed in all animals, except in one of the E. russatus. Positive results were found in the MAT 14 days after T. gondii infection in all three species of rodents and IFAT of the control group (M. musculus) was also positive 14 days after infection using anti-mouse (homologous) conjugate. The use of heterologous secondary antibody conjugates should be used with caution and the MAT had a good agreement for serological diagnosis of T. gondii in the studied rodent species.

A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo Toxoplasma gondii, que afeta uma grande variedade de vertebrados. Os roedores são hospedeiros intermediários e servem de alimento para felinos, os hospedeiros definitivos. No entanto, por causa da elevada variedade de espécies na ordem Rodentia, o diagnóstico serológico é difícil de ser realizado, uma vez que as técnicas mais empregadas requerem a utilização de um anticorpo específico conjugado com fluoresceína ou enzimas. O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de um conjugado secundário heterólogo na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para diagnóstico de anticorpos anti-T. gondii em duas espécies de roedores silvestres: Euryoryzomys russatus (WAGNER, 1848) e Calomys callosus (RENGGER, 1830). A espécie Mus musculus (Linnaeus, 1758) foi utilizada como controle do conjugado. As três espécies de roedores foram experimentalmente infectadas com cinco cistos de T. gondii (cepas ME 49) por animal. O Teste de Aglutinação Modificado (MAT), que não requer o uso de conjugados, bem como, a presença de cistos de T. gondii nos roedores foram usados para confirmar a infecção. Para cada espécie de animal, amostras de soro foram coletadas durante cinco semanas e testadas (50 amostras por espécie de roedor, total de 150 amostras). Nenhuma das amostras de C. callosus e E. russatus foram positivas na RIFI, quando foi usado o conjugado heterólogo anti-camundongo. Cistos cerebrais de T. gondii foram microscopicamente observados em todos os animais, exceto em um dos E. russatus. Resultados positivos foram encontrados pelo MAT após 14 dias de inoculação em todas as três espécies estudadas e pela RIFI no grupo controle (M. musculus), também no dia 14 após a infecção utilizando conjugado anti-camundongo. O uso de conjugados secundários heterólogos deve ser empregado com cautela e o MAT apresentou uma boa concordância para o diagnóstico sorológico de T. gondii nas espécies de roedores estudadas.

Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos leiteiros, cães e trabalhadores rurais da região Sudoeste do Estado de Mato Grosso

Considering the importance of neosporosis in the animal health and production, the frequency of antibodies to Neospora caninum was evaluated in dairy cattle of the Southwestern region of Mato Grosso State, Brazil, in addition to serum samples obtained from dogs and humans living in the farms. A total of 1036 serum samples were analyzed, from which 932 were from dairy bovine females, 37 from dogs and 67 from humans, from 24 farms and examined by the indirect fluorescent antibody test (IFAT). Reactive human serum samples were retested by Western-blotting to confirm the results. Antibodies to N. caninum were found in 499 cattle sera (53.5 %), with at least one positive in each farm, 25 dog sera (67.6 %) and seven human sera (10.5 %). There was no significant difference in the number of positive cattle sera according to age group. The results indicate a wide dissemination of N. caninum in the studied region.

Considerando a importância da neosporose interferindo na produtividade animal, avaliou-se a frequência de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras de soros de bovinos leiteiros da Região Sudoeste do Estado de Mato Grosso, Brasil, complementando-se com amostras sorológicas colhidas de cães e de humanos que conviviam nas mesmas propriedades rurais amostradas. Um total de 1.036 amostras de soros foram analisadas, sendo 932 de fêmeas bovinas leiteiras, 37 de cães e 67 de humanos, provenientes de 24 propriedades e examinados por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). As amostras de soros humanos reagentes foram testadas novamente por Western-blotting para confirmação dos resultados. Anticorpos anti-N. caninum foram encontrados em 499 bovinos (53,5%), em pelo menos um animal positivo por propriedade, em 25 caninos (67,6%) e em sete humanos (10,5%). Não houve diferença significativa no número de bovinos positivos por faixa etária. Os resultados obtidos indicam uma ampla disseminação de N. caninum na região estudada.

Efficacy and persistence of cypermethrin 4.5% + DDVP 50% (Ectofarma®) in the control of Boophilus microplus and larvae of Dermatobia hominis on naturally infested crossbred dairy cattle / Eficácia e persistência da associação de cipermetrina 4,5 % + DDVP 50% (Ectofarma®) no controle do Boophilus microplus e de larvas de Dermatobia hominis em bovinos leiteiros, mestiços, naturalmente infestados

The effectiveness and persistence of Ectofarma* in the control of B. microplus and D. hominis larvae were evaluated. Initially, the effect on estimated reproduction and percentage of reduction was determined by dipping female ticks in 1:400 diluted solution of the product. The percentage of reduction was 95.34, and the reduction on hatchability of larvae was 100%. Then, in a field trial the product, in the same dilution, was handsprayed over a group of nine bovines. The number of ticks on treated and untreated animals were counted on days 0 ,1 ,2 ,3 ,7 ,1 4 ,2 1 , 28, 35 and 42 after treatment. D. hominis larvae were counted on day 3 and further, weekly, until the sixth week. The efficacy in vitro of Ectofarma" on the hatchability of B. microplus eggs was 100%. In the field trial this product was highly effective against ticks during 3 weeks, and ticks mean number on the treated group was lower than on control one, until thefourth week after treatment. Reduction of D.hominis larvae reached 65% on the third day post-treatment, and mean number of larvae in treated animals was always lower than the amount found in untreated ones.

Testou-se a sensibilidade da cepa de B. microplus do campus de Pirassununga da USP ao Ectofarma®, na diluição 1:400 através dobiocarrapaticidograma. A ovipostura no grupo tratado (A) foi reduzida em 95,34%, em relação ao grupo-controle (B) e a eclosão de larvas provenientes dos ovos do grupo B foi de 100%, enquanto no grupo A não ocorreu eclosão. Diante desse resultado, efetuou-se o teste a campo, utilizando dois grupos de nove bovinos mestiços. No dia 0 os números médios de B. microplus a 5 mm e de bernes nos animais dos dois grupos eram estatisticamente iguais. Os bovinos do grupo A foram aspergidos com o produto na mesma diluição utilizada no teste in vitro. Os carrapatos foram contados nos dias 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 e 42 e os bernes no 3fi dia pós-tratamento (dpt) e depois, semanalmente, até a 68 semana. Houve redução drástica no número médio de carrapatos do grupo A do primeiro ao 210 dpt, aumentando a partir de 28® dpt. A redução do número médio de larvas de D. hominis chegou a 65% no 35 dpt, nos animais do grupo tratado, e embora a eficácia do produto tenha sido baixa, o número médio de bernes no grupo A foi sempre menor do que no grupo B, após o tratamento.

Some nutritional and metabolic aspects of calves maintained under two different dietary protein and experimentally infected with Haemonchus placei / Alguns aspectos nutricionais e metabólicos de bezerros mantidos com dois níveis diferentes de proteína na dieta e infectados experimentalmente com Haemonchus placei

The experiment was carried out to study the effects of the dietary protein and the infection with H. placei on nutritional parameters in six-months-old calves, based on their response to an infection of 100,000 infective larvae. Treatments consisted of two protein levels, 97.8 (G1) and 175.3 (G2) g of crude protein per kg of dry matter. After three monthsreceiving the diet, the animals were infected. Five days prior and 30 d after infection, animals were kept in metabolic cages to measure diet digestibility, water and N balance. Thirty-five days after infection, animals were slaughtered, abomasum removed and the worm burdens counted. There were no statistical differences in live weight changes, butanimals from G1 showed a tendency to decrease weight after infection. The protein level in diet showed an effect (p 0.01) on plasma, urea and protein. The infection affected (p 0.05) haematocrit, haemoglobin, albumin and total plasma protein. Crude protein digestibility was lower (p 0.05) in G1. Dry matter and crude protein digestibilities werenot affected by infection. Nitrogen balance was lower for G1 and urine nitrogen excretion was increased (p 0.01) by infection. There was no effect on water balance. It is suggested that some of the nutritive parameters studied were affected by protein level in diet, as well as by the infection with H. placei.

O presente experimento teve por objetivo o estudo dos parâmetros nutricionais em bezerros mantidos sob dietas com dois níveis protéicos e infectados com 100.000 larvas infectantes de H. placei. Os animais do grupo 1 (G1) receberam uma dieta com 97,8 g de proteína bruta (PB) por kg de matéria seca (MS) e os do grupo 2 (G2), 175,3 g PB kg 1 MS.A infecção foi realizada três meses após o início da dieta. Cinco dias antes e 30 dias após a infecção, os animais foram colocados em gaiolas metabólicas para estudos de digestibilidade e balanços hídrico e de nitrogênio. Trinta e cinco dias pós-infecção os bezerros foram abatidos e os vermes recuperados. A variação de peso nos dois grupos não foi estatisticamente diferente (p > 0,05) e houve uma tendência, nos animais do G1, a reduzir o ganho de peso após a infecção. O nível protéico da dieta teve efeito significativo (p 0,01) nos teores de uréia e proteína plasmática; por outro lado, a infecção afetou os teores de hematócrito, hemoglobina, albumina e proteína total (p 0,05). Adigestibilidade aparente da PB foi inferior (p 0,05) no G1 e a digestibilidade da MS e PB não foram afetadas pela infecção (p > 0,05). O balanço de nitrogênio foi inferior no G1 (p 0,01) e a infecção alterou a excreção de nitrogênio via urina (p 0,01). O balanço hídrico não mostrou significância (p > 0,05) para as fontes de variação